Biospec Zirconia Bead Media

Bead beaters av rotortyp drivs av mikromotorer och använder zirkoniumdioxidpärlor för att bryta sönder celler och sega vävnader. Deras höga skjuvkraft ger en snabb och grundlig upplösning.

Seriella spädningar av både målmikroorganismer och genomiskt DNA från internkontrollen pärlades med antingen OmniLyse-enheten eller industristandardbänkmodellen Biospec Mini-BeadBeater i tre exemplar för att generera resultat för jämförelse vid varje koncentrationsnivå.

Storlekar

Biospec erbjuder pärlor i flera storlekar som är utformade för att rikta in sig på olika vävnader och celler, från glas (diameter 2,5 mm, densitet 2,5 g/cc) som används för pärlbearbetning till zirkoniumdioxid-/silikapärlor med 50% högre densitet som är idealiska för sporer och vävnader) och skarpa granatpartiklar (densitet 4,1 g/cc; påskyndar vävnadslysis) som finns i flaskor om ett pund.

Alla tre medierna är kemiskt inerta och motståndskraftiga mot fragmentering, vilket gör dem till den perfekta lösningen för att sönderdela mikroorganismer, encellspreparat eller växt- och djurvävnader med upp till 95% effektivitet på tre minuter.

BeadBeater kan också användas med olika flaskstorlekar (upp till 1,0 mL) och blandare, inklusive vortexmaskiner.

Laboratorieblandare och homogenisator för småprover tillverkad av rotor-stator i rostfritt stål, behändig och mobil, kraftfull motor med hastighetsreglering från 5.000 till 30.000 varv/min för blandning, emulgering, strimling eller hackning (inklusive stor mortel/stöt för krossning) av prover med behandlingsbar volym på mindre än 1/2 ml.

Tillämpningar

Ett prov på två ml tinad myggvävnad läggs i en steril homogeniseringsflaska med 2,0 mm zirkoniumdioxidpärlor och 0,5 ml homogeniseringsmedium för att homogeniseras i två minuter med hjälp av SoniBeast Cell Disruptor från BioSpec Products i Bartlesville, Oklahoma och förvaras som homogenat (se bilden nedan).

Zirkoniumdioxid-/silikapärlor med en densitet på 2,5 g/cc används ofta för att pärla bakterie-, jäst- och svamprover samt för att mala frön och blad torra, medan kromstålpärlor har en extremt hög densitet på 7,9 g/cc och endast ska placeras i förstärkta 2 ml mikroflaskor av polypropen eller polypropylen som tål att stålpärlorna krossas; vanliga mikroflaskor av plast med skruvlock spricker eller läcker vid kollision med stålpärlor.

Börja med kalla medier och prover för bästa resultat, eftersom uppvärmning under pärlningen försämrar både kvaliteten och kvantiteten av nukleinsyror, proteiner och funktionella subcellulära organeller som isolerats från lyserade celler eller organismer. En isvattenjacka hjälper till att hantera temperaturen under pärlningen.

Säkerhet

Mini-Beadbeater-Plus omrör kraftigt upp till ett halvt gram biologiskt material som är förseglat i en 2 ml mikroflaska med skruvlock och fylld med lysande glas-, zirkoniumdioxid- eller stålpärlor på 90 sekunder utan skum- eller aerosolbildning, och sönderdelar mikroorganismer, växt- eller djurvävnader samt nukleinsyror med minimal korskontaminering mellan prover samt är användbar vid isolering av nukleinsyror. För optimala resultat ska fasta prover först hackas i bitar med ett tvärsnitt på mindre än 1 mm med ett eneggat rakblad eller fragmenteras i flytande kväve med hjälp av BioPulverizer från BioSpec Products.

Glaspärlor har vanligtvis en densitet på 2,5 g/cc och är det självklara valet för applikationer med beadbeating. Zirkonia/Silica-pärlor har 50% högre densitet än glas - perfekt för tuffa vävnader som sporer. Vassa partiklar av kromstål har en densitet på 7,9 g/cc för malning av torkade blad eller frön vid kryotemperaturer; när torrmalning vid kryotemperaturer är nödvändig måste dock speciella "XXTuff"-förstärkta polypropylen- eller rostfria stålmikroflaskor användas, eftersom vanliga glas-/polypropylenflaskor kan spricka under höga skakningsenergier eller högt tryck som genereras av "Beadbeater".

Granat (en skarp järn-aluminiumsilikatpartikel) har en densitet på 4,1 g/cc och kan snabbt avlägsna bakterierika vävnader samt fekala prover från jordprover och fekala prover, till skillnad från dess motsvarighet i kiselkarbid (SiC) som kan fragmenteras under tryck.

VANLIGA FRÅGOR

PMSA är en effektiv metod för att detektera potentiella rekombinanta prioner, där zirkoniumdioxid-kiseldioxidpärlor ger utmärkt såddkapacitet som gör att de kan spridas eller expandera i efterföljande reaktioner av PMSA-reaktionen. Det väcker viktiga frågor om spontan felveckning av proteiner i biologiska system och ger upphov till betydande spekulationer om dess natur och frekvens. PMSA-proceduren erbjuder ett billigt och enkelt sätt att identifiera distinkta rekombinanta prionstammar via elektroforetiska bandmönster efter proteinas K-digestion (PMSA-proceduren).

PMSA-reaktioner kan utföras med hjälp av olika pärlor utöver glaspärlor, där zirkoniumsilikatpärlor med en diameter på 1 mm är det optimala valet för att inducera sann spontan felveckning av rec-PrP på grund av deras högre densitet (3,0 g/cc jämfört med 2,5 g/cc i glaspärlor), vilket ökar spridningen av förformade prioner.

För att avgöra om zirkoniumsilikatpärlor kunde utlösa en verklig spontan felveckning av rec-PrP späddes torkade prionbelagda glassfärer seriellt (1:10 från 10-1 till 10-8) med PMSA-substrat, kompletterat med tre zirkoniumsilikatpärlor med en diameter på en millimeter från BioSpec Products Inc (BioSpec). Efter att reaktionen hade pågått i 24 timmar vid 39 grader med skakning 700 rpm och skakning vid 39 grader C, togs pärlorna upp, tvättades noggrant i PBS innan de återanvändes som frön i en annan reaktion med nytt substrat och ytterligare icke prionbelagda pärlor.