Rotor-type bead beaters drives av mikromotorer og bruker zirkoniumperler for \u00e5 bryte opp celler og seigt vev. Den h\u00f8ye skj\u00e6rkraften s\u00f8rger for rask og grundig oppbryting.<\/p>\n
Serielle fortynninger av b\u00e5de m\u00e5lmikroorganismer og internt genomisk kontroll-DNA ble beatet med enten OmniLyse-apparatet eller industristandarden Biospec Mini-BeadBeater i tre eksemplarer for \u00e5 generere resultater for sammenligning p\u00e5 hvert konsentrasjonsniv\u00e5.<\/p>\n
Biospec tilbyr flere st\u00f8rrelser av perler som er utformet for \u00e5 treffe ulike vev og celler, fra glassperler (diameter 2,5 mm, tetthet 2,5 g\/cm3) som brukes til beadbeating, til zirkonia\/silikakuler med 50% h\u00f8yere tetthet som er ideelle for sporer og vev) og skarpe granatpartikler (tetthet 4,1 g\/cm3; akselererer vevslysis) som er tilgjengelige i flasker p\u00e5 ett kilo.<\/p>\n
Alle de tre perlemediene er kjemisk inerte og motstandsdyktige mot fragmentering, noe som gj\u00f8r dem til den ideelle l\u00f8sningen for disruptering av mikroorganismer, enkeltcellepreparater eller plante-\/dyrevev med en effektivitet p\u00e5 opptil 95% p\u00e5 tre minutter.<\/p>\n
BeadBeater kan ogs\u00e5 brukes med ulike hetteglassst\u00f8rrelser (opptil 1,0 ml) og miksere, inkludert vortexere.<\/p>\n
Laboratoriemikser og homogenisator for sm\u00e5 pr\u00f8ver laget av rotor-stator i rustfritt st\u00e5l, hendig og mobil, kraftig motor med hastighetsregulering fra 5000 til 30 000 o\/min for blanding, emulgering, kverning eller hakking (inkludert stor m\u00f8rtel\/stempel for knusing) av pr\u00f8ver med behandlingsvolum p\u00e5 mindre enn 1\/2 ml.<\/p>\n
En pr\u00f8ve p\u00e5 to ml tint myggvev tilsettes et sterilt homogeniseringsglass med 2,0 mm Zirconia-kuler og 0,5 ml homogeniseringsmedium for \u00e5 homogeniseres i to minutter ved hjelp av SoniBeast Cell Disruptor fra BioSpec Products i Bartlesville, Oklahoma, og lagres som homogenat (se bildet nedenfor).<\/p>\n
Zirkonia-\/silikakuler med en tetthet p\u00e5 2,5 g\/cm3 er mye brukt til beadbeating av bakterie-, gj\u00e6rsopp- og sopp-pr\u00f8ver samt til t\u00f8rking av fr\u00f8 og blader, mens kromst\u00e5lkuler har en ekstremt h\u00f8y tetthet p\u00e5 7,9 g\/cm3 og kun b\u00f8r plasseres i forsterkede 2 ml-mikroflasker av polypropylen eller polypropylen som t\u00e5ler knusing av st\u00e5lkuler; vanlige mikroflasker av plast med skruelokk vil sprekke eller lekke ved kollisjon med st\u00e5lkuler.<\/p>\n
Begynn med kalde medier og pr\u00f8ver for \u00e5 oppn\u00e5 optimale resultater, siden oppvarming under beadbeating vil forringe b\u00e5de kvaliteten og mengden av nukleinsyrer, proteiner og funksjonelle subcellul\u00e6re organeller som er isolert fra lyserte celler eller organismer. En isvannsjakke hjelper deg med \u00e5 styre temperaturen under beadbeating.<\/p>\n
Mini-Beadbeater-Plus r\u00f8rer voldsomt opp til et halvt gram biologisk materiale som er forseglet i et 2 ml mikroflak med skruelokk fylt med lysingsperler av glass, zirkoniumoksid eller st\u00e5l, p\u00e5 90 sekunder uten skum- eller aerosoldannelse, og oppl\u00f8ser mikroorganismer, plante- eller dyrevev samt nukleinsyrer med minimal krysskontaminering mellom pr\u00f8vene, i tillegg til at den er nyttig ved isolering av nukleinsyrer. For \u00e5 oppn\u00e5 optimale resultater b\u00f8r faste pr\u00f8ver f\u00f8rst hakkes opp i biter med et enegget barberblad med et tverrsnitt p\u00e5 mindre enn 1 mm, eller fragmenteres ved flytende nitrogentemperaturer ved hjelp av BioPulverizer fra BioSpec Products.<\/p>\n
Glassperler har vanligvis en tetthet p\u00e5 2,5 g\/cm3 og er det foretrukne valget for beadbeating-applikasjoner. Zirkonia\/Silica-perler har 50% h\u00f8yere tetthet enn glass - ideelt for seigt vev som sporer. Skarpe partikler av kromst\u00e5l har en tetthet p\u00e5 7,9 g\/cm3 for kverning av t\u00f8rkede blader eller fr\u00f8 ved kryotemperaturer; n\u00e5r det er n\u00f8dvendig med t\u00f8rr kverning ved kryotemperaturer, m\u00e5 det imidlertid brukes spesielle \"XXTuff\"-forsterkede mikroglass av polypropylen eller rustfritt st\u00e5l, ettersom vanlige glass-\/polypropylenglass kan sprekke under h\u00f8y risteenergi eller h\u00f8yt trykk som genereres av \"Beadbeater\".<\/p>\n
Granat (en skarp partikkel av jern-aluminiumsilikat) har en tetthet p\u00e5 4,1 g\/cm3 og kan raskt l\u00f8sne bakterieholdig vev samt fekale pr\u00f8ver fra jordpr\u00f8ver og avf\u00f8ringspr\u00f8ver, i motsetning til motstykket av silisiumkarbid (SiC) som kan fragmentere under trykk.<\/p>\n
PMSA er en effektiv metode for \u00e5 p\u00e5vise potensielle rekombinante prioner, og zirkonia-silikakuler gir utmerket seeding-kapasitet som gj\u00f8r det mulig \u00e5 spre eller ekspandere dem i p\u00e5f\u00f8lgende PMSA-reaksjoner. Det reiser viktige sp\u00f8rsm\u00e5l om spontan feilfolding av proteiner i biologiske systemer, og gir opphav til mange spekulasjoner om arten og hyppigheten av slike feilfoldinger. PMSA-prosedyren er en billig og enkel metode for \u00e5 identifisere forskjellige rekombinante prionstammer ved hjelp av elektroforetiske b\u00e5ndm\u00f8nstre etter proteinase K-ford\u00f8yelse (PMSA-prosedyre).<\/p>\n
PMSA-reaksjoner kan utf\u00f8res med forskjellige perler i tillegg til glassperler, der zirkoniumsilikatperler med en diameter p\u00e5 1 mm er det optimale valget for \u00e5 indusere ekte spontan feilfolding av rec-PrP p\u00e5 grunn av deres h\u00f8yere tetthet (3,0 g\/cm3 sammenlignet med 2,5 g\/cm3 i glassperler), noe som \u00f8ker spredningen av preformerte prioner.<\/p>\n
For \u00e5 finne ut om zirkoniumsilikatperler kunne utl\u00f8se ekte spontan feilfolding av rec-PrP, ble t\u00f8rkede prionbelagte glasskuler fortynnet serielt (1:10 fra 10-1 til 10-8) med PMSA-substrat, supplert med tre zirkoniumsilikatperler som m\u00e5lte \u00e9n millimeter i diameter fra BioSpec Products Inc (BioSpec). Etter at reaksjonen hadde p\u00e5g\u00e5tt i 24 timer ved 39 grader med risting ved 700 o\/min, ble kulene tatt ut, vasket grundig i PBS f\u00f8r de ble gjenbrukt som seeds i en ny reaksjon med nytt substrat og ytterligere ikke prionbelagte kuler.<\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"
Rotor-type bead beaters drives av mikromotorer og bruker zirkoniumperler for \u00e5 bryte opp celler og seigt vev. Den h\u00f8ye skj\u00e6rkraften gir rask og grundig oppl\u00f8sning. Serielle fortynninger av b\u00e5de m\u00e5lmikroorganismer og internt genomisk kontroll-DNA ble beadbeatet ved hjelp av enten OmniLyse-enheten eller industristandarden Biospec Mini-BeadBeater i tre eksemplarer for \u00e5 generere ...<\/p>\n