Rotor-type bead beaters drives av mikromotorer og bruker zirkoniumperler for å bryte opp celler og seigt vev. Den høye skjærkraften sørger for rask og grundig oppbryting.
Serielle fortynninger av både målmikroorganismer og internt genomisk kontroll-DNA ble beatet med enten OmniLyse-apparatet eller industristandarden Biospec Mini-BeadBeater i tre eksemplarer for å generere resultater for sammenligning på hvert konsentrasjonsnivå.
Størrelser
Biospec tilbyr flere størrelser av perler som er utformet for å treffe ulike vev og celler, fra glassperler (diameter 2,5 mm, tetthet 2,5 g/cm3) som brukes til beadbeating, til zirkonia/silikakuler med 50% høyere tetthet som er ideelle for sporer og vev) og skarpe granatpartikler (tetthet 4,1 g/cm3; akselererer vevslysis) som er tilgjengelige i flasker på ett kilo.
Alle de tre perlemediene er kjemisk inerte og motstandsdyktige mot fragmentering, noe som gjør dem til den ideelle løsningen for disruptering av mikroorganismer, enkeltcellepreparater eller plante-/dyrevev med en effektivitet på opptil 95% på tre minutter.
BeadBeater kan også brukes med ulike hetteglassstørrelser (opptil 1,0 ml) og miksere, inkludert vortexere.
Laboratoriemikser og homogenisator for små prøver laget av rotor-stator i rustfritt stål, hendig og mobil, kraftig motor med hastighetsregulering fra 5000 til 30 000 o/min for blanding, emulgering, kverning eller hakking (inkludert stor mørtel/stempel for knusing) av prøver med behandlingsvolum på mindre enn 1/2 ml.
Bruksområder
En prøve på to ml tint myggvev tilsettes et sterilt homogeniseringsglass med 2,0 mm Zirconia-kuler og 0,5 ml homogeniseringsmedium for å homogeniseres i to minutter ved hjelp av SoniBeast Cell Disruptor fra BioSpec Products i Bartlesville, Oklahoma, og lagres som homogenat (se bildet nedenfor).
Zirkonia-/silikakuler med en tetthet på 2,5 g/cm3 er mye brukt til beadbeating av bakterie-, gjærsopp- og sopp-prøver samt til tørking av frø og blader, mens kromstålkuler har en ekstremt høy tetthet på 7,9 g/cm3 og kun bør plasseres i forsterkede 2 ml-mikroflasker av polypropylen eller polypropylen som tåler knusing av stålkuler; vanlige mikroflasker av plast med skruelokk vil sprekke eller lekke ved kollisjon med stålkuler.
Begynn med kalde medier og prøver for å oppnå optimale resultater, siden oppvarming under beadbeating vil forringe både kvaliteten og mengden av nukleinsyrer, proteiner og funksjonelle subcellulære organeller som er isolert fra lyserte celler eller organismer. En isvannsjakke hjelper deg med å styre temperaturen under beadbeating.
Sikkerhet
Mini-Beadbeater-Plus rører voldsomt opp til et halvt gram biologisk materiale som er forseglet i et 2 ml mikroflak med skruelokk fylt med lysingsperler av glass, zirkoniumoksid eller stål, på 90 sekunder uten skum- eller aerosoldannelse, og oppløser mikroorganismer, plante- eller dyrevev samt nukleinsyrer med minimal krysskontaminering mellom prøvene, i tillegg til at den er nyttig ved isolering av nukleinsyrer. For å oppnå optimale resultater bør faste prøver først hakkes opp i biter med et enegget barberblad med et tverrsnitt på mindre enn 1 mm, eller fragmenteres ved flytende nitrogentemperaturer ved hjelp av BioPulverizer fra BioSpec Products.
Glassperler har vanligvis en tetthet på 2,5 g/cm3 og er det foretrukne valget for beadbeating-applikasjoner. Zirkonia/Silica-perler har 50% høyere tetthet enn glass - ideelt for seigt vev som sporer. Skarpe partikler av kromstål har en tetthet på 7,9 g/cm3 for kverning av tørkede blader eller frø ved kryotemperaturer; når det er nødvendig med tørr kverning ved kryotemperaturer, må det imidlertid brukes spesielle "XXTuff"-forsterkede mikroglass av polypropylen eller rustfritt stål, ettersom vanlige glass-/polypropylenglass kan sprekke under høy risteenergi eller høyt trykk som genereres av "Beadbeater".
Granat (en skarp partikkel av jern-aluminiumsilikat) har en tetthet på 4,1 g/cm3 og kan raskt løsne bakterieholdig vev samt fekale prøver fra jordprøver og avføringsprøver, i motsetning til motstykket av silisiumkarbid (SiC) som kan fragmentere under trykk.
VANLIGE SPØRSMÅL
PMSA er en effektiv metode for å påvise potensielle rekombinante prioner, og zirkonia-silikakuler gir utmerket seeding-kapasitet som gjør det mulig å spre eller ekspandere dem i påfølgende PMSA-reaksjoner. Det reiser viktige spørsmål om spontan feilfolding av proteiner i biologiske systemer, og gir opphav til mange spekulasjoner om arten og hyppigheten av slike feilfoldinger. PMSA-prosedyren er en billig og enkel metode for å identifisere forskjellige rekombinante prionstammer ved hjelp av elektroforetiske båndmønstre etter proteinase K-fordøyelse (PMSA-prosedyre).
PMSA-reaksjoner kan utføres med forskjellige perler i tillegg til glassperler, der zirkoniumsilikatperler med en diameter på 1 mm er det optimale valget for å indusere ekte spontan feilfolding av rec-PrP på grunn av deres høyere tetthet (3,0 g/cm3 sammenlignet med 2,5 g/cm3 i glassperler), noe som øker spredningen av preformerte prioner.
For å finne ut om zirkoniumsilikatperler kunne utløse ekte spontan feilfolding av rec-PrP, ble tørkede prionbelagte glasskuler fortynnet serielt (1:10 fra 10-1 til 10-8) med PMSA-substrat, supplert med tre zirkoniumsilikatperler som målte én millimeter i diameter fra BioSpec Products Inc (BioSpec). Etter at reaksjonen hadde pågått i 24 timer ved 39 grader med risting ved 700 o/min, ble kulene tatt ut, vasket grundig i PBS før de ble gjenbrukt som seeds i en ny reaksjon med nytt substrat og ytterligere ikke prionbelagte kuler.
Norwegian 
English 
Swedish 
Dutch 
Danish 
Finnish