Roottorityyppiset helmi-iskurit saavat voimansa mikromoottoreista, ja niiss\u00e4 k\u00e4ytet\u00e4\u00e4n zirkoniumoksidihelmi\u00e4 solujen ja sitkeiden kudosten rikkomiseen. Niiden suuri leikkausvoima saa aikaan nopean ja perusteellisen hajoamisen.<\/p>\n
Sek\u00e4 kohdemikro-organismien ett\u00e4 sis\u00e4isen kontrollin genomisen DNA:n sarjalaimennokset helmetettiin joko OmniLyse-laitteella tai alan standardipenkkik\u00e4ytt\u00f6\u00f6n tarkoitetulla Biospec Mini-BeadBeater -laitteella kolmena kappaleena, jotta saatiin vertailutulokset kullakin pitoisuustasolla.<\/p>\n
Biospec tarjoaa useita erikokoisia helmi\u00e4, jotka on suunniteltu kohdistumaan erilaisiin kudoksiin ja soluihin, lasista (halkaisija 2,5 mm, tiheys 2,5 g\/cm3), jota k\u00e4ytet\u00e4\u00e4n helmihakkaamiseen, zirkoniumoksidi-\/silikahelmiin, joiden tiheys on 50% suurempi ja jotka ovat ihanteellisia iti\u00f6ille ja kudoksille) ja granaattihiukkasiin (tiheys 4,1 g\/cm3; nopeuttaa kudoslyysia), joita on saatavana kilon painoisissa pulloissa.<\/p>\n
Kaikki kolme helmi-mediaa ovat kemiallisesti inerttej\u00e4 ja kest\u00e4v\u00e4t fragmentoitumista, joten ne ovat ihanteellinen ratkaisu mikro-organismien, yksisoluisten valmisteiden tai kasvi-\/el\u00e4inkudosten hajottamiseen jopa 95%:n tehokkuudella kolmessa minuutissa.<\/p>\n
BeadBeateria voidaan k\u00e4ytt\u00e4\u00e4 my\u00f6s erikokoisten injektiopullojen (enint\u00e4\u00e4n 1,0 ml) ja sekoittimien, kuten vortex-sekoittimien, kanssa.<\/p>\n
Ruostumattomasta ter\u00e4ksest\u00e4 valmistettu pienen n\u00e4ytteen laboratoriosekoitin ja homogenisaattori, roottori-staattori, k\u00e4tev\u00e4 ja liikuteltava, tehokas moottori, jossa on nopeuden s\u00e4\u00e4t\u00f6 5 000 - 30 000 rpm sekoittamiseen, emulgointiin, murskaamiseen tai pilkkomiseen (mukaan lukien suuri laasti\/varras murskaamiseen) alle 1\/2 ml:n k\u00e4sitelt\u00e4vien n\u00e4ytteiden tilavuuteen.<\/p>\n
Kahden millilitran n\u00e4yte sulatettua hyttyskudosta lis\u00e4t\u00e4\u00e4n steriiliin homogenisointimikropulloon, jossa on 2,0 mm:n zirkoniumoksidihelmi\u00e4 ja 0,5 ml homogenisointiv\u00e4linett\u00e4, jotta se voidaan homogenisoida kahden minuutin ajan k\u00e4ytt\u00e4m\u00e4ll\u00e4 SoniBeast Cell Disruptor -laitetta, jonka on valmistanut BioSpec Products of Bartlesville, Oklahoma, ja s\u00e4ilytt\u00e4\u00e4 homogenisaattina (ks. kuva alla).<\/p>\n
Zirkonia-\/piihappoja, joiden tiheys on 2,5 g\/cm3 , k\u00e4ytet\u00e4\u00e4n laajalti bakteeri-, hiiva- ja sienin\u00e4ytteiden helmihakkaamiseen sek\u00e4 siementen ja lehtien kuivaksi jauhamiseen, kun taas kromiter\u00e4shelmien tiheys on eritt\u00e4in suuri (7,9 g\/cm3 ), ja ne tulisi sijoittaa vain sellaisiin vahvistettuihin tai polypropeenista valmistettuihin 2 ml:n mikropulloihin, jotka kest\u00e4v\u00e4t ter\u00e4shelmien puristamisen; tavalliset ruuvikorkilliset muoviset mikropullot halkeilevat tai vuotavat ter\u00e4ksen helmien t\u00f6rm\u00e4yksen aiheuttaman iskun seurauksena.<\/p>\n
Aloita kylm\u00e4ll\u00e4 v\u00e4liaineella ja n\u00e4ytteell\u00e4 optimaalisten tulosten saamiseksi, sill\u00e4 l\u00e4mmitt\u00e4minen helmihehkutuksen aikana heikent\u00e4\u00e4 lysoiduista soluista tai organismeista eristettyjen nukleiinihappojen, proteiinien ja toiminnallisten alisoluorganellien laatua ja m\u00e4\u00e4r\u00e4\u00e4. J\u00e4\u00e4vesivaippa auttaa hallitsemaan l\u00e4mp\u00f6tilaa helmihehkutuksen aikana.<\/p>\n
Mini-Beadbeater-Plus sekoittaa rajusti jopa puoli grammaa biologista materiaalia, joka on suljettu 2 ml:n kierrekorkilliseen, lasi-, zirkonia- tai ter\u00e4ksisill\u00e4 lysing-helmill\u00e4 t\u00e4ytettyyn mikrovialiin 90 sekunnissa ilman vaahtoamista tai aerosolin muodostumista, ja hajottaa mikro-organismit, kasvi- tai el\u00e4inkudokset sek\u00e4 nukleiinihapot mahdollisimman v\u00e4h\u00e4isell\u00e4 ristikontaminaatiolla n\u00e4ytteiden v\u00e4lill\u00e4 sek\u00e4 on k\u00e4ytt\u00f6kelpoinen nukleiinihappojen erist\u00e4misess\u00e4. Optimaalisen tuloksen saavuttamiseksi kiinte\u00e4t n\u00e4ytteet on ensin pilkottava alle 1 mm:n poikkileikkaukseltaan pieniksi paloiksi yksis\u00e4rm\u00e4isell\u00e4 partater\u00e4ll\u00e4 tai pirstottava nestem\u00e4isen typen l\u00e4mp\u00f6tiloissa BioSpec Productsin BioPulverizerilla.<\/p>\n
Lasihelmien tiheys on tyypillisesti 2,5 g\/cm3 , ja ne ovat paras valinta helmihakkaussovelluksiin. Zirkoniumoksidi-\/piidioksidihelmien tiheys on 50% suurempi kuin lasin - ihanteellinen koville kudoksille, kuten iti\u00f6ille. Kromiter\u00e4ksisten ter\u00e4vien hiukkasten tiheys on 7,9 g\/cm3 kuivattujen lehtien tai siementen jauhamiseen kryol\u00e4mp\u00f6tiloissa; kun kuiva jauhaminen kryol\u00e4mp\u00f6tiloissa on kuitenkin tarpeen, on k\u00e4ytett\u00e4v\u00e4 erityisi\u00e4 \"XXTuff\"-vahvisteisia polypropyleeni- tai ruostumattomasta ter\u00e4ksest\u00e4 valmistettuja mikrohippuja, sill\u00e4 tavalliset lasi\/polypropyleenihipput saattavat murtua korkeissa ravisteluenergioissa tai \"Beadbeater\"-laitteen tuottamassa korkeassa paineessa.<\/p>\n
Granaatin (rauta-alumiinisilikaatti-ter\u00e4v\u00e4 hiukkanen) tiheys on 4,1 g\/cm3 , ja se voi nopeasti irrottaa runsaasti bakteereja sis\u00e4lt\u00e4vi\u00e4 kudoksia sek\u00e4 ulosten\u00e4ytteit\u00e4 maaper\u00e4n\u00e4ytteist\u00e4 ja ulosten\u00e4ytteist\u00e4, toisin kuin sen piikarbidista (SiC) valmistettu vastine, joka saattaa pirstoutua paineen alaisena.<\/p>\n
PMSA tarjoaa tehokkaan menetelm\u00e4n mahdollisten rekombinanttisten prionien havaitsemiseen, sill\u00e4 zirkonia-silika-helmet tarjoavat erinomaisen kylv\u00f6kapasiteetin, joka mahdollistaa niiden levi\u00e4misen tai laajenemisen PMSA-reaktion my\u00f6hemmiss\u00e4 reaktioissa. Se her\u00e4tt\u00e4\u00e4 t\u00e4rkeit\u00e4 kysymyksi\u00e4 spontaanista proteiinien v\u00e4\u00e4r\u00e4nlaisesta taittumisesta biologisissa j\u00e4rjestelmiss\u00e4 ja her\u00e4tt\u00e4\u00e4 merkitt\u00e4vi\u00e4 spekulaatioita sen luonteesta ja esiintymistiheydest\u00e4. PMSA-menettely tarjoaa edullisen ja suoraviivaisen keinon tunnistaa erilliset rekombinanttiprionikannat proteinaasi K:n pilkkomisen j\u00e4lkeisen elektroforeettisen kaistakuvion avulla (PMSA-menettely).<\/p>\n
PMSA-reaktiot voidaan suorittaa k\u00e4ytt\u00e4m\u00e4ll\u00e4 lasihelmien lis\u00e4ksi erilaisia helmi\u00e4, ja halkaisijaltaan 1 mm:n zirkoniumsilikaattihelmet ovat optimaalinen valinta todellisen spontaanin rec-PrP:n v\u00e4\u00e4r\u00e4nlaisen taittumisen indusoimiseksi, koska niiden tiheys on suurempi (3,0 g\/cm3, kun lasihelmien tiheys on 2,5 g\/cm3), mik\u00e4 lis\u00e4\u00e4 valmiiksi muodostuneiden prionien levi\u00e4mist\u00e4.<\/p>\n
Sen m\u00e4\u00e4ritt\u00e4miseksi, voisivatko zirkoniumsilikaattihelmet laukaista todellisen spontaanin rec-PrP:n v\u00e4\u00e4r\u00e4nlaisen taittumisen, kuivatut prionipinnoitetut lasipallot laimennettiin sarjassa (1:10 10-1:st\u00e4 10-8:aan) PMSA-substraatilla, jota t\u00e4ydennettiin kolmella halkaisijaltaan yhden millimetrin kokoisella zirkoniumsilikaattihelmell\u00e4, jotka olivat per\u00e4isin BioSpec Products Inc:lt\u00e4 (BioSpec). Kun reaktio oli kest\u00e4nyt 24 tuntia 39 asteen l\u00e4mp\u00f6tilassa 700 kierrosta minuutissa ravistelemalla ja ravistelemalla 39 asteen l\u00e4mp\u00f6tilassa, helmet ker\u00e4ttiin talteen, pestiin perusteellisesti PBS:ss\u00e4 ennen kuin ne k\u00e4ytettiin uudelleen siemenin\u00e4 toisessa reaktiossa, jossa k\u00e4ytettiin tuoretta substraattia ja ylim\u00e4\u00e4r\u00e4isi\u00e4 prionipinnoittamattomia helmi\u00e4.<\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"
Roottorityyppiset helmi-iskurit saavat voimansa mikromoottoreista, ja niiss\u00e4 k\u00e4ytet\u00e4\u00e4n zirkoniumoksidihelmi\u00e4 solujen ja sitkeiden kudosten rikkomiseen. Niiden suuri leikkausvoima saa aikaan nopean ja perusteellisen hajoamisen. Sek\u00e4 kohdemikro-organismien ett\u00e4 sis\u00e4isen kontrollin genomisen DNA:n sarjalaimennokset helmetettiin joko OmniLyse-laitteella tai alan standardin mukaisella penkkik\u00e4ytt\u00f6isell\u00e4 Biospec Mini-BeadBeater -laitteella kolmena kappaleena, jotta saatiin ...<\/p>\n