Biospec Zirkoniumoksidihelmi media

Roottorityyppiset helmi-iskurit saavat voimansa mikromoottoreista, ja niissä käytetään zirkoniumoksidihelmiä solujen ja sitkeiden kudosten rikkomiseen. Niiden suuri leikkausvoima saa aikaan nopean ja perusteellisen hajoamisen.

Sekä kohdemikro-organismien että sisäisen kontrollin genomisen DNA:n sarjalaimennokset helmetettiin joko OmniLyse-laitteella tai alan standardipenkkikäyttöön tarkoitetulla Biospec Mini-BeadBeater -laitteella kolmena kappaleena, jotta saatiin vertailutulokset kullakin pitoisuustasolla.

Koot

Biospec tarjoaa useita erikokoisia helmiä, jotka on suunniteltu kohdistumaan erilaisiin kudoksiin ja soluihin, lasista (halkaisija 2,5 mm, tiheys 2,5 g/cm3), jota käytetään helmihakkaamiseen, zirkoniumoksidi-/silikahelmiin, joiden tiheys on 50% suurempi ja jotka ovat ihanteellisia itiöille ja kudoksille) ja granaattihiukkasiin (tiheys 4,1 g/cm3; nopeuttaa kudoslyysia), joita on saatavana kilon painoisissa pulloissa.

Kaikki kolme helmi-mediaa ovat kemiallisesti inerttejä ja kestävät fragmentoitumista, joten ne ovat ihanteellinen ratkaisu mikro-organismien, yksisoluisten valmisteiden tai kasvi-/eläinkudosten hajottamiseen jopa 95%:n tehokkuudella kolmessa minuutissa.

BeadBeateria voidaan käyttää myös erikokoisten injektiopullojen (enintään 1,0 ml) ja sekoittimien, kuten vortex-sekoittimien, kanssa.

Ruostumattomasta teräksestä valmistettu pienen näytteen laboratoriosekoitin ja homogenisaattori, roottori-staattori, kätevä ja liikuteltava, tehokas moottori, jossa on nopeuden säätö 5 000 - 30 000 rpm sekoittamiseen, emulgointiin, murskaamiseen tai pilkkomiseen (mukaan lukien suuri laasti/varras murskaamiseen) alle 1/2 ml:n käsiteltävien näytteiden tilavuuteen.

Sovellukset

Kahden millilitran näyte sulatettua hyttyskudosta lisätään steriiliin homogenisointimikropulloon, jossa on 2,0 mm:n zirkoniumoksidihelmiä ja 0,5 ml homogenisointivälinettä, jotta se voidaan homogenisoida kahden minuutin ajan käyttämällä SoniBeast Cell Disruptor -laitetta, jonka on valmistanut BioSpec Products of Bartlesville, Oklahoma, ja säilyttää homogenisaattina (ks. kuva alla).

Zirkonia-/piihappoja, joiden tiheys on 2,5 g/cm3 , käytetään laajalti bakteeri-, hiiva- ja sieninäytteiden helmihakkaamiseen sekä siementen ja lehtien kuivaksi jauhamiseen, kun taas kromiteräshelmien tiheys on erittäin suuri (7,9 g/cm3 ), ja ne tulisi sijoittaa vain sellaisiin vahvistettuihin tai polypropeenista valmistettuihin 2 ml:n mikropulloihin, jotka kestävät teräshelmien puristamisen; tavalliset ruuvikorkilliset muoviset mikropullot halkeilevat tai vuotavat teräksen helmien törmäyksen aiheuttaman iskun seurauksena.

Aloita kylmällä väliaineella ja näytteellä optimaalisten tulosten saamiseksi, sillä lämmittäminen helmihehkutuksen aikana heikentää lysoiduista soluista tai organismeista eristettyjen nukleiinihappojen, proteiinien ja toiminnallisten alisoluorganellien laatua ja määrää. Jäävesivaippa auttaa hallitsemaan lämpötilaa helmihehkutuksen aikana.

Turvallisuus

Mini-Beadbeater-Plus sekoittaa rajusti jopa puoli grammaa biologista materiaalia, joka on suljettu 2 ml:n kierrekorkilliseen, lasi-, zirkonia- tai teräksisillä lysing-helmillä täytettyyn mikrovialiin 90 sekunnissa ilman vaahtoamista tai aerosolin muodostumista, ja hajottaa mikro-organismit, kasvi- tai eläinkudokset sekä nukleiinihapot mahdollisimman vähäisellä ristikontaminaatiolla näytteiden välillä sekä on käyttökelpoinen nukleiinihappojen eristämisessä. Optimaalisen tuloksen saavuttamiseksi kiinteät näytteet on ensin pilkottava alle 1 mm:n poikkileikkaukseltaan pieniksi paloiksi yksisärmäisellä partaterällä tai pirstottava nestemäisen typen lämpötiloissa BioSpec Productsin BioPulverizerilla.

Lasihelmien tiheys on tyypillisesti 2,5 g/cm3 , ja ne ovat paras valinta helmihakkaussovelluksiin. Zirkoniumoksidi-/piidioksidihelmien tiheys on 50% suurempi kuin lasin - ihanteellinen koville kudoksille, kuten itiöille. Kromiteräksisten terävien hiukkasten tiheys on 7,9 g/cm3 kuivattujen lehtien tai siementen jauhamiseen kryolämpötiloissa; kun kuiva jauhaminen kryolämpötiloissa on kuitenkin tarpeen, on käytettävä erityisiä "XXTuff"-vahvisteisia polypropyleeni- tai ruostumattomasta teräksestä valmistettuja mikrohippuja, sillä tavalliset lasi/polypropyleenihipput saattavat murtua korkeissa ravisteluenergioissa tai "Beadbeater"-laitteen tuottamassa korkeassa paineessa.

Granaatin (rauta-alumiinisilikaatti-terävä hiukkanen) tiheys on 4,1 g/cm3 , ja se voi nopeasti irrottaa runsaasti bakteereja sisältäviä kudoksia sekä ulostenäytteitä maaperänäytteistä ja ulostenäytteistä, toisin kuin sen piikarbidista (SiC) valmistettu vastine, joka saattaa pirstoutua paineen alaisena.

FAQ

PMSA tarjoaa tehokkaan menetelmän mahdollisten rekombinanttisten prionien havaitsemiseen, sillä zirkonia-silika-helmet tarjoavat erinomaisen kylvökapasiteetin, joka mahdollistaa niiden leviämisen tai laajenemisen PMSA-reaktion myöhemmissä reaktioissa. Se herättää tärkeitä kysymyksiä spontaanista proteiinien vääränlaisesta taittumisesta biologisissa järjestelmissä ja herättää merkittäviä spekulaatioita sen luonteesta ja esiintymistiheydestä. PMSA-menettely tarjoaa edullisen ja suoraviivaisen keinon tunnistaa erilliset rekombinanttiprionikannat proteinaasi K:n pilkkomisen jälkeisen elektroforeettisen kaistakuvion avulla (PMSA-menettely).

PMSA-reaktiot voidaan suorittaa käyttämällä lasihelmien lisäksi erilaisia helmiä, ja halkaisijaltaan 1 mm:n zirkoniumsilikaattihelmet ovat optimaalinen valinta todellisen spontaanin rec-PrP:n vääränlaisen taittumisen indusoimiseksi, koska niiden tiheys on suurempi (3,0 g/cm3, kun lasihelmien tiheys on 2,5 g/cm3), mikä lisää valmiiksi muodostuneiden prionien leviämistä.

Sen määrittämiseksi, voisivatko zirkoniumsilikaattihelmet laukaista todellisen spontaanin rec-PrP:n vääränlaisen taittumisen, kuivatut prionipinnoitetut lasipallot laimennettiin sarjassa (1:10 10-1:stä 10-8:aan) PMSA-substraatilla, jota täydennettiin kolmella halkaisijaltaan yhden millimetrin kokoisella zirkoniumsilikaattihelmellä, jotka olivat peräisin BioSpec Products Inc:ltä (BioSpec). Kun reaktio oli kestänyt 24 tuntia 39 asteen lämpötilassa 700 kierrosta minuutissa ravistelemalla ja ravistelemalla 39 asteen lämpötilassa, helmet kerättiin talteen, pestiin perusteellisesti PBS:ssä ennen kuin ne käytettiin uudelleen siemeninä toisessa reaktiossa, jossa käytettiin tuoretta substraattia ja ylimääräisiä prionipinnoittamattomia helmiä.