Rotor-type bead beaters drives af mikromotorer og bruger zirkoniumdioxidperler til at bryde celler og sejt v\u00e6v. Deres h\u00f8je forskydningskraft skaber hurtig og grundig opbrydning.<\/p>\n
Serielle fortyndinger af b\u00e5de m\u00e5lmikroorganismer og internt genomisk kontrol-DNA blev beatet med enten OmniLyse-enheden eller industristandard benchtop Biospec Mini-BeadBeater i tre eksemplarer for at generere resultater til sammenligning p\u00e5 hvert koncentrationsniveau.<\/p>\n
Biospec tilbyder flere st\u00f8rrelser af perler, der er designet til at ramme forskellige v\u00e6v og celler, fra glas (diameter 2,5 mm, densitet p\u00e5 2,5 g\/cc), der bruges til beadbeating, til zirkoniumdioxid\/silica-perler med 50% h\u00f8jere densitet, der er ideelle til sporer og v\u00e6v) og skarpe granatpartikler (densitet 4,1 g\/cc; fremskynder v\u00e6vslysis), der f\u00e5s i flasker p\u00e5 1 pund.<\/p>\n
Alle tre beadmedier er kemisk inerte og modstandsdygtige over for fragmentering, hvilket g\u00f8r dem til den ideelle l\u00f8sning til at nedbryde mikroorganismer, enkeltcellepr\u00e6parater eller plante-\/dyrev\u00e6v med op til 95% effektivitet p\u00e5 tre minutter.<\/p>\n
BeadBeater kan ogs\u00e5 bruges med forskellige h\u00e6tteglasst\u00f8rrelser (op til 1,0 mL) og blandere, herunder vortexere.<\/p>\n
Laboratoriemixer og homogenisator til sm\u00e5 pr\u00f8ver lavet af rotor-stator i rustfrit st\u00e5l, handy og mobil, kraftig motor med hastighedskontrol fra 5.000 til 30.000 o\/min til blanding, emulgering, shredding eller hakning (inklusive stor morter\/pind til knusning) af pr\u00f8ver p\u00e5 mindre end 1\/2 ml, der kan behandles.<\/p>\n
En pr\u00f8ve p\u00e5 to ml opt\u00f8et myggev\u00e6v tils\u00e6ttes til et sterilt homogeniseringsglas med 2,0 mm zirkoniumdioxidperler og 0,5 ml homogeniseringsmedie for at blive homogeniseret i to minutter ved hj\u00e6lp af SoniBeast Cell Disruptor fra BioSpec Products i Bartlesville, Oklahoma, og opbevares som homogenat (se billedet nedenfor).<\/p>\n
Zirconia\/Silica-kugler med en massefylde p\u00e5 2,5 g\/cc bruges i vid udstr\u00e6kning til beadbeating af bakterie-, g\u00e6r- og svampepr\u00f8ver samt til at male fr\u00f8 og blade t\u00f8rre, mens Chrome-Steel-kugler har en ekstremt tung massefylde p\u00e5 7,9 g\/cc og kun b\u00f8r placeres i forst\u00e6rkede eller polypropylen 2 ml mikroflasker, der kan modst\u00e5 knusning af st\u00e5lkugler; almindelige plastmikroflasker med skruel\u00e5g vil kn\u00e6kke eller l\u00e6kke under p\u00e5virkning af kollision med st\u00e5lkugler.<\/p>\n
Start med kolde medier og pr\u00f8ver for at f\u00e5 optimale resultater, da opvarmning under beadbeating vil forringe b\u00e5de kvaliteten og m\u00e6ngden af nukleinsyrer, proteiner og funktionelle subcellul\u00e6re organeller, der er isoleret fra lyserede celler eller organismer. En isvandskappe hj\u00e6lper med at styre temperaturen under beadbeating.<\/p>\n
Mini-Beadbeater-Plus omr\u00f8rer voldsomt op til et halvt gram biologisk materiale, der er forseglet i et 2 ml mikroglas med skruel\u00e5g fyldt med lysende glas-, zirkoniumdioxid- eller st\u00e5lperler, p\u00e5 90 sekunder uden skumdannelse eller aerosoldannelse og opl\u00f8ser mikroorganismer, plante- eller dyrev\u00e6v samt nukleinsyrer med minimal krydskontaminering mellem pr\u00f8verne og er ogs\u00e5 nyttig ved isolering af nukleinsyrer. For at opn\u00e5 optimale resultater skal faste pr\u00f8ver f\u00f8rst hakkes i stykker med et tv\u00e6rsnit p\u00e5 mindre end 1 mm med et barberblad med en enkelt kant eller fragmenteres ved flydende nitrogentemperaturer ved hj\u00e6lp af BioPulverizer fra BioSpec Products.<\/p>\n
Glasperler har typisk en massefylde p\u00e5 2,5 g\/cc og er det foretrukne valg til beadbeating. Zirconia\/Silica-perler har 50% h\u00f8jere densitet end glas - ideelt til h\u00e5rdt v\u00e6v som f.eks. sporer. Skarpe partikler af kromst\u00e5l har en massefylde p\u00e5 7,9 g\/cc til formaling af t\u00f8rrede blade eller fr\u00f8 ved kryotemperaturer; n\u00e5r t\u00f8r formaling ved kryotemperaturer er n\u00f8dvendig, skal der dog bruges s\u00e6rlige \"XXTuff\"-forst\u00e6rkede polypropylen- eller rustfrit st\u00e5l-mikroglas, da almindelige glas-\/polypropylenglas kan revne under h\u00f8je rysteenergier eller h\u00f8jt tryk genereret af \"Beadbeateren\".<\/p>\n
Granat (en skarp jern-aluminiumsilikatpartikel) har en massefylde p\u00e5 4,1 g\/cc og kan hurtigt l\u00f8sne bakterierigt v\u00e6v samt f\u00e6kale pr\u00f8ver fra jordpr\u00f8ver og aff\u00f8ringspr\u00f8ver, i mods\u00e6tning til dens modstykke af siliciumcarbid (SiC), som kan splintres under tryk.<\/p>\n
PMSA er en effektiv metode til at opdage potentielle rekombinante prioner, hvor zirkoniumdioxid-silikakugler giver fremragende s\u00e5ningskapacitet, der tillader deres udbredelse eller udvidelse i efterf\u00f8lgende reaktioner af PMSA-reaktionen. Det rejser vigtige sp\u00f8rgsm\u00e5l om spontan misfoldning af proteiner i biologiske systemer og giver anledning til betydelige spekulationer om deres natur og hyppighed. PMSA-proceduren er et billigt og ligetil middel til at identificere forskellige rekombinante prionstammer via elektroforetiske b\u00e5ndm\u00f8nstre efter proteinase K-ford\u00f8jelse (PMSA-proceduren).<\/p>\n
PMSA-reaktioner kan udf\u00f8res med forskellige perler ud over glasperler, hvor zirkoniumsilikatperler med en diameter p\u00e5 1 mm er det optimale valg til at fremkalde \u00e6gte spontan fejlfoldning af rec-PrP p\u00e5 grund af deres h\u00f8jere t\u00e6thed (3,0 g\/cc sammenlignet med 2,5 g\/cc i glasperler), hvilket \u00f8ger udbredelsen af pr\u00e6formerede prioner.<\/p>\n
For at afg\u00f8re, om zirkoniumsilikatperler kunne udl\u00f8se \u00e6gte spontan fejlfoldning af rec-PrP, blev t\u00f8rrede prionbelagte glaskugler fortyndet serielt (1:10 fra 10-1 til 10-8) med PMSA-substrat, suppleret med tre zirkoniumsilikatperler med en diameter p\u00e5 en millimeter fra BioSpec Products Inc (BioSpec). Efter at reaktionen havde st\u00e5et p\u00e5 i 24 timer ved 39 grader med omrystning ved 700 omdrejninger i minuttet, blev perlerne taget op og vasket grundigt i PBS, f\u00f8r de blev genbrugt som seeds i en ny reaktion med frisk substrat og yderligere ikke-prionbelagte perler.<\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"
Rotor-type bead beaters drives af mikromotorer og bruger zirkoniumdioxidperler til at bryde celler og sejt v\u00e6v. Deres h\u00f8je forskydningskraft giver en hurtig og grundig nedbrydning. Serielle fortyndinger af b\u00e5de m\u00e5lmikroorganismer og internt kontrolgenomisk DNA blev beaded ved hj\u00e6lp af enten OmniLyse-enheden eller industristandard benchtop Biospec Mini-BeadBeater i tre eksemplarer for at generere ...<\/p>\n