Biospec Zirconia Bead Media

Rotor-type bead beaters drives af mikromotorer og bruger zirkoniumdioxidperler til at bryde celler og sejt væv. Deres høje forskydningskraft skaber hurtig og grundig opbrydning.

Serielle fortyndinger af både målmikroorganismer og internt genomisk kontrol-DNA blev beatet med enten OmniLyse-enheden eller industristandard benchtop Biospec Mini-BeadBeater i tre eksemplarer for at generere resultater til sammenligning på hvert koncentrationsniveau.

Størrelser

Biospec tilbyder flere størrelser af perler, der er designet til at ramme forskellige væv og celler, fra glas (diameter 2,5 mm, densitet på 2,5 g/cc), der bruges til beadbeating, til zirkoniumdioxid/silica-perler med 50% højere densitet, der er ideelle til sporer og væv) og skarpe granatpartikler (densitet 4,1 g/cc; fremskynder vævslysis), der fås i flasker på 1 pund.

Alle tre beadmedier er kemisk inerte og modstandsdygtige over for fragmentering, hvilket gør dem til den ideelle løsning til at nedbryde mikroorganismer, enkeltcellepræparater eller plante-/dyrevæv med op til 95% effektivitet på tre minutter.

BeadBeater kan også bruges med forskellige hætteglasstørrelser (op til 1,0 mL) og blandere, herunder vortexere.

Laboratoriemixer og homogenisator til små prøver lavet af rotor-stator i rustfrit stål, handy og mobil, kraftig motor med hastighedskontrol fra 5.000 til 30.000 o/min til blanding, emulgering, shredding eller hakning (inklusive stor morter/pind til knusning) af prøver på mindre end 1/2 ml, der kan behandles.

Anvendelser

En prøve på to ml optøet myggevæv tilsættes til et sterilt homogeniseringsglas med 2,0 mm zirkoniumdioxidperler og 0,5 ml homogeniseringsmedie for at blive homogeniseret i to minutter ved hjælp af SoniBeast Cell Disruptor fra BioSpec Products i Bartlesville, Oklahoma, og opbevares som homogenat (se billedet nedenfor).

Zirconia/Silica-kugler med en massefylde på 2,5 g/cc bruges i vid udstrækning til beadbeating af bakterie-, gær- og svampeprøver samt til at male frø og blade tørre, mens Chrome-Steel-kugler har en ekstremt tung massefylde på 7,9 g/cc og kun bør placeres i forstærkede eller polypropylen 2 ml mikroflasker, der kan modstå knusning af stålkugler; almindelige plastmikroflasker med skruelåg vil knække eller lække under påvirkning af kollision med stålkugler.

Start med kolde medier og prøver for at få optimale resultater, da opvarmning under beadbeating vil forringe både kvaliteten og mængden af nukleinsyrer, proteiner og funktionelle subcellulære organeller, der er isoleret fra lyserede celler eller organismer. En isvandskappe hjælper med at styre temperaturen under beadbeating.

Sikkerhed

Mini-Beadbeater-Plus omrører voldsomt op til et halvt gram biologisk materiale, der er forseglet i et 2 ml mikroglas med skruelåg fyldt med lysende glas-, zirkoniumdioxid- eller stålperler, på 90 sekunder uden skumdannelse eller aerosoldannelse og opløser mikroorganismer, plante- eller dyrevæv samt nukleinsyrer med minimal krydskontaminering mellem prøverne og er også nyttig ved isolering af nukleinsyrer. For at opnå optimale resultater skal faste prøver først hakkes i stykker med et tværsnit på mindre end 1 mm med et barberblad med en enkelt kant eller fragmenteres ved flydende nitrogentemperaturer ved hjælp af BioPulverizer fra BioSpec Products.

Glasperler har typisk en massefylde på 2,5 g/cc og er det foretrukne valg til beadbeating. Zirconia/Silica-perler har 50% højere densitet end glas - ideelt til hårdt væv som f.eks. sporer. Skarpe partikler af kromstål har en massefylde på 7,9 g/cc til formaling af tørrede blade eller frø ved kryotemperaturer; når tør formaling ved kryotemperaturer er nødvendig, skal der dog bruges særlige "XXTuff"-forstærkede polypropylen- eller rustfrit stål-mikroglas, da almindelige glas-/polypropylenglas kan revne under høje rysteenergier eller højt tryk genereret af "Beadbeateren".

Granat (en skarp jern-aluminiumsilikatpartikel) har en massefylde på 4,1 g/cc og kan hurtigt løsne bakterierigt væv samt fækale prøver fra jordprøver og afføringsprøver, i modsætning til dens modstykke af siliciumcarbid (SiC), som kan splintres under tryk.

OFTE STILLEDE SPØRGSMÅL

PMSA er en effektiv metode til at opdage potentielle rekombinante prioner, hvor zirkoniumdioxid-silikakugler giver fremragende såningskapacitet, der tillader deres udbredelse eller udvidelse i efterfølgende reaktioner af PMSA-reaktionen. Det rejser vigtige spørgsmål om spontan misfoldning af proteiner i biologiske systemer og giver anledning til betydelige spekulationer om deres natur og hyppighed. PMSA-proceduren er et billigt og ligetil middel til at identificere forskellige rekombinante prionstammer via elektroforetiske båndmønstre efter proteinase K-fordøjelse (PMSA-proceduren).

PMSA-reaktioner kan udføres med forskellige perler ud over glasperler, hvor zirkoniumsilikatperler med en diameter på 1 mm er det optimale valg til at fremkalde ægte spontan fejlfoldning af rec-PrP på grund af deres højere tæthed (3,0 g/cc sammenlignet med 2,5 g/cc i glasperler), hvilket øger udbredelsen af præformerede prioner.

For at afgøre, om zirkoniumsilikatperler kunne udløse ægte spontan fejlfoldning af rec-PrP, blev tørrede prionbelagte glaskugler fortyndet serielt (1:10 fra 10-1 til 10-8) med PMSA-substrat, suppleret med tre zirkoniumsilikatperler med en diameter på en millimeter fra BioSpec Products Inc (BioSpec). Efter at reaktionen havde stået på i 24 timer ved 39 grader med omrystning ved 700 omdrejninger i minuttet, blev perlerne taget op og vasket grundigt i PBS, før de blev genbrugt som seeds i en ny reaktion med frisk substrat og yderligere ikke-prionbelagte perler.